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人肺胰蛋白酶活性(83)

的决心 人肺胰蛋白酶活性(83)

用n -苯甲酰- phe - val - arg - pna (EPC编号. NB32)作为底物.

 

所需的材料

1.     Buffer; 0.1 M Tris pH 8.3在25ºC制备. 混合0.1 M Tris-HCl变成0.1 M Tris-base,直到pH =
8.3 25°C.

2.     Buffer; 0.05 NaOAc pH 5.0. 混合0.05 M HAc变成0.05 M NaOAc至pH = 5.0 25ºC.

3.     Substrate Solution; 1.0 mM. 先溶解68.0 mg. N-Benzoyl-Phe-Val-Arg-pNA (EPC没有.
NB32) 1毫升1-甲基-2-吡咯烷酮. 用三角缓冲液调至100毫升.
 

4.     酶解. 溶解1.0毫克每毫升在0.05 M NaOAc pH 5. 保持在5°C.
 

过程

1.     将分光光度计调至410 nm,电池温度调至25℃.

2.     吸管2.70毫升缓冲液(pH 8.3 Tris)进入牢房. 添加0.3ml底物溶液. 混合,平衡
电池温度为25℃.

3.     加入5μl酶溶液,测定从初始反应开始每分钟吸光度增加量.
 

比活度计算 

= 3卷.1毫升                = 410海里T = 25ºC光路= 1厘米

Î, 1毫米酪氨酸= 0.964

单位  =  (∆A256/x(3分钟).01 ml)
mg              0.964 x 0.001 mg

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