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羧肽酶B活性(54)

所需的材料

1. Tris buffer; 0.2 M pH 7.7在25°C含0.2 M氯化钠.

2. Substrate solution; 2.0 mM. 68年解散.0毫克海皮酰- l-精氨酸在100毫升水. 加热至大约50°C,如有必要,搅拌以加速溶解. 冷却到室温. 准备每日新鲜. 保持冰.

3. Enzyme solution; dissolve 0.tris缓冲液1mg /ml. 保持冰.

过程

1. 将分光光度计调至254 nm,电池温度调至25℃

2. 混合1.5毫升三磷酸缓冲液和1.细胞内5ml底物溶液. 平衡到25°C

3. 加入CPB溶液20 μl, 混合并测定吸光度的增加速率, 每隔30秒做3分钟. 计算 从初始线性反应到254nm/min.

比活度计算

Î, 1%, 280 = 21.2 mg/ml=A280 × 0.472卷= 3.02 ml A= 254 nM T= 25°C
光路= 1.0 cm
0.349 = 1 mM马尿酸在pH = 7时的吸光度增加.7

单位  =  ∆A / x 3分钟.02 ml
mg          0.349 x 0.002 mg

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